在上一篇应用文章《利用步琦 SFC 系统纯化利多卡因与乙酰氨基酚》中，我们使用超临界流体色谱（SFC）高效纯化了利多卡因和乙酰氨基酚的合成产物。

　　在此过程中，我们先使用步琦独有的 Sepmatix 8x SFC 平行色谱系统快速筛选了色谱柱，之后将其放大到 BUCHI Sepiatec SFC-50 超临界制备色谱系统上。本次应用中，我们依旧会使用同样的工作流程去纯化阿司匹林、苯佐卡因和普鲁卡因的合成产物。

　　所有 10mm ID 色谱柱都在预设流速下平衡 3 分钟，使用自动进样器上样，并开始运行。背压调节器设置为 150 bar，柱子加热至 40℃，可按需往改性剂中加入添加剂改善峰型。

　　5.1 阿司匹林阿司匹林，化学名为乙酰水杨酸（下称 ASA），是一种众所周知的镇痛和抗炎药物。它属于非甾体抗炎药（NSAIDs）这一类。可以通过将水杨酸（下称 SA）与乙酸酐发生酯化反应而化学合成（见

　　图5） [1] 。为了确定乙酰水杨酸的理想分离选择性，首先进行了色谱柱柱筛选（见图1）。

　　▲图 1：顶部：阿司匹林合成的反应方程式，底部：Sepmatix 8x SFC 仪器色谱柱筛选结果；从左到右：硅胶，氨基，二醇基，氰基，2-EP，HILIC，PEI和CBD；运行时间双赢购彩平台 双赢彩票网页 = 10分钟。

　　由于 SA 在固定相中的保留性较高，为了强制洗脱 SA，在梯度中增加了一个等度步骤，即在 50% 改性剂浓度下进行 5 分钟的等度洗脱。在 HILIC 相中，ASA 和 SA 只有噪音而无洗脱。在 PEI 相中，在实验条件下只有 ASA 被洗脱。除氰基相外，其余各相均显示出 ASA 和 SA 的分离。结合分离时长和分辨率而言，2-EP 相的结果最好（见

　　图 2（上）显示了在甲醇比例为 40% 的10x250mm 2-EP 色谱柱上纯化 ASA 和 SA 的情况。改性剂中添加了甲酸（0.5%），以改善 SA 的峰形。在不添加甲酸的情况下，SA 的拖尾非常严重。在相同条件下，可采用叠加进样法自动纯化 ASA（见图2下），并进行馏分收集。

　　5.2 苯佐卡因苯佐卡因（下称 BC），化学名为对氨基苯甲酸乙酯，属于局部麻醉剂类。它可以从对氨基苯甲酸（下称 PABA）通过酸催化羧基与乙醇的酯化反应化学合成，用硫酸作为催化剂 [2]。首先进行色谱柱筛选，以确定苯佐卡因合成产物理想的分离选择性（见

　　▲图3：顶部：苯佐卡因合成反应方程式，底部：Sepmatix 8x SFC仪器色谱柱筛选结果；从左到右：硅胶，氨基，二醇基，氰基，2-双赢彩票在线购彩 双赢彩票平台EP，HILIC，PEI和CBD；运行时间 = 15分钟。

　　表2）。HILIC 和氨基相的分辨率最高，但 PABA 的保留时间过长，即使用50%的甲醇洗脱，依旧需要很长时间。

　　图 4（上图）显示了 10 x 250mm 的二醇基色谱柱在甲醇比例为 28% 时对苯佐卡因的纯化情况。在相同条件下，可采用叠加进样法自动纯化 BC（见图4下），并进行馏分收集。

　　▲图 4：苯佐卡因的单次注射（顶部）和堆叠注射（底部）纯化；运行条件：流速 = 20 mL/min， 改性剂 = 甲醇，改性剂 % = 28%，温度 = 40 °C，压力 BPR = 150 bar，注射量 = 90 μL，UV 波长 =276nm；堆叠注射条件：注射次数 =12，堆叠时间 =0.66min，馏分 =1（基于时间的）。

　　5.3 普鲁卡因普鲁卡因（下称 PC），化学名为 4-氨基苯甲酸 2-(N, N-二乙基氨基)乙酯，是一种药物，具有局部麻醉作用。它阻断电压依赖性钠离子通道，从而导致例如疼痛敏感性的降低。普鲁卡因可以通过化学方法在碱性条件下从 4-氨基苯甲酸乙酯（下称ABE）合成。这涉及到使用 2-二乙基氨基乙醇进行酯交换[3]。碱是乙醇钠醇，它可以通过钠与乙醇的反应产生。为确定普鲁卡因合成产物纯化的理想选择性，进行了色谱柱筛选（见

　　▲图5：顶部：普鲁卡因合成的反应方程式，底部：Sepmatix 8x SFC 仪器色谱柱筛选结果；从左到右：硅胶，氨基，二醇基，氰基，2-EP，HILIC，PEI 和 CBD；运行时间 = 15分钟。

　　由于普鲁卡因的基本特性，在部分色谱柱上的峰形非常不对称。二醇基相下的峰前沿非常明显，不对称度系数为 0.58，而硅胶相下的拖尾非常明显，不对称度系数为 2.73。

　　筛选结果表明，PC 和 ABE 在改性剂含量约为 24 - 32% 时可以从色谱柱内洗脱下来。

　　图6（上图）显示了10 x 250mm 的 2-EP 色谱柱在改性剂含量为 25% 时纯化 PC 的情况。在相同条件下，可采用叠加进样法自动纯化 PC（见图6，下图）并收集馏分，添加添加剂可显著改善 PC 的峰形。

　　BUCHI Sepmatix 8x SFC 平行色谱系统可快速筛选填料并放大至制备规格，既能提高样品分离度，又能充分利用色谱柱上样量，为 BUCHI Sepiatec SFC-50 制备系统的叠加进样奠定良好基础，二者结合可达到降本增效的目的。

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